DIFERENCIACE LIDSKÝCH EMBRYONÁLNÍCH KMENOVÝCH BUNĚK A LIDSKÝCH PLURIPOTENTNÍCH KMENOVÝCH BUNĚK V KARDIOMYOCYTY IN VITRO

Lidské embryonální kmenové buňky (hES) se mohou diferencovat v kardiomyocyty (CMs) v in vitro podmínkách. Je známa metoda kokultivace s END2 buňkami, diferenciace cytokiny na matrigelu a působením cytokinů na kulaté shluky buněk, Embryoid bodies (EB metoda). Výsledkem diferenciace jsou rytmicky se stahující buňky, objevující se týden po zahájení diferenciačního protokolu srovnatelné s jednotlivými typy srdečních buněk. Dosavadní studie se potýkají s velmi nízkou výtěžností procesu a variabilitou dle druhu využité linie. Cílem studie bylo získat EB metodou CMs. Dalším cílem bylo vytvoření CMs z indukovaných pluripotentních buněk (iPS). Studie se zabývala zlepšením efektivity procesu. Byly použity hES linie CCTL, LF MU a iPS linie (po indukci kožních buněk zdravých dobrovolníků). Diferenciace byla indukována metodou dle Kellera. Úvodem byly zformovány tělíska (1500-2000 buněk). K modifikování efektivity diferenciace byly využity: ActivinA, BMP4, VEGF, FGF2 a C vit. Byla provedena modifikace protokolu, v jedné sadě bylo ponecháno fetální bovinní sérum (FBS) pro zlepšení formace EB tělísek. Výsledky: Ode dne 12 se v modifikovaném protokolu začaly objevovat rytmicky se stahující shluky (cca 10 stahů za minutu). Maximum pulzací bylo zjištěno mezi dny  16- 20, kdy 24 z 30 počítaných přisedlých EB spontánně pulzovalo. Ve stejném médiu byly v menší míře pozorovány i pulzující EBs z iPS linie. Kontrolní sada neprokazovala žádné pulzace. Předběžné IC barvení shluků naznačuje pozitivitu protilátek proti TnT a RyR2. Ve srovnávací skupině nebyly tyto proteiny zjištěny. Závěr: Prokázali jsme diferenciaci hES liní CCTL a vlastní iPS linie upravenou metodou formace EBs. Kombinace cytokinů umožňuje vysokou účinnost procesu získávání lidských srdečních buněk.